简介:摘要目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)对人食管癌EC9706细胞蛋白激酶CK2β基因表达的影响。方法体外转录合成CK2βsiRNA,转染EC9706细胞,采用RT-PCR及免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的表达水平。结果各实验组CK2β表达量均较对照组降低(p<0.05)。结论特异性siRNA能有效抑制EC9706细胞中CK2β基因的表达。
简介:摘要目的探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通过qRT-PCR和蛋白质印迹法评估基因沉默效果及检测凋亡相关蛋白表达。应用MTT法检测转染后细胞的增殖变化。采用流式细胞术检测干扰GTPBP4基因表达后细胞凋亡变化。应用克隆形成实验检测细胞照射后放射敏感性变化。结果GEO数据库分析表明GTPBP4基因在人食管癌组织中的表达明显高于正常邻近食管组织(P<0.001)。与空白对照组和阴性对照组相比,干扰组EC9706细胞的GTPBP4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(均P<0.001),表明质粒成功转染EC9706细胞。MTT检测结果显示干扰组EC9706细胞增殖率受到显著抑制(P<0.001)。流式细胞术结果显示干扰组EC9706细胞凋亡率明显升高(P<0.001),细胞凋亡明显增加(P<0.001);凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3、Bax)表达明显升高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达下降(P<0.001、P=0.001、P=0.0014、P=0.005)。克隆形成实验结果显示干扰组EC9706细胞放射增敏比1.716。结论GTPBP4基因在人食管癌组织中高表达,RNAi技术可有效抑制EC9706细胞GTPBP4基因表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强细胞对放射线的敏感性。
简介:通过测定不同剂量X射线辐照的人食管癌细胞(Ec9706)的拉曼光谱,分析发现:不同剂量组Ec9706细胞受到的影响存在较大差异。与对照组相比,Ec9706细胞内的蛋白质、核酸和脂类的含量随辐照剂量的增加逐渐增强,6Gy时强度最大,辐照剂量继续增大,各物质含量反而出现大幅减少。蛋白质主链构象中的酰胺Ⅰ和酰胺Ⅲ对应谱带在较大剂量组(6—12Gy)发生较明显的频移,说明较大剂量X射线对Ec9706细胞内部蛋白质的构象造成较大损伤。较特别地是β-胡萝卜素的C=C振动谱带1525cm。存在于对照组中,在各辐照组中仅出现在6Gy组,这表明该剂量X射线辐照对于Ec9706细胞存在特殊的作用。
简介:目的构建表达针对HBsAg小发卡RNA(shRNA)的重组腺相关病毒载体,以观察该病毒在体外对HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法将表达针对HBsAg的shRNA定向克隆到pAAV/U6-hrGFP质粒中,获得重组表达质粒(pAAV-shHBs-hrGFP);采用磷酸钙转染法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染AAV293细胞,进行rAAV-shHBs-hrGFP重组病毒包装。收获病毒感染HepG2.215细胞;采用ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平。结果酶切鉴定、测序结果表明,pAAV-shHBs-hrGFP载体成功构建。包装收获的rAAV-shHBs-hrGFP病毒液可以感染HepG2.215细胞,并且可以抑制HBsAg和HBeAg的表达。结论制备的rAAV-shHBs-hrGFP病毒载体能够抑制HBV在体外的抗原表达。
简介:【摘要】目的:探讨观察联合检测梅毒特异性和非特异性抗体的临床应用价值。方法:2020.8-2021.10,选取疑似梅毒血样117份进行研究,分别应用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、酶联免疫吸附试验(TP-Ab)进行检测,以临床综合诊断结果为金标准,比较两种检测方法与联合检测方法的结果。结果:临床综合诊断显示,有42例梅毒患者。TP-Ab联合TRUST检测的准确性、敏感性、特异性均大于TP-Ab单一检测、TRUST单一检测(P<0.05)。结论:联合检测梅毒血样的特异性抗体及非特异性抗体,可提升疾病诊断准确性,值得推广。
简介:AIM:RecombinedplasmidpETNF-P16wasconstructedtoinvestigateitsexpressionpropertiesinesophagealsquamouscarcinomacelllineEC9706inducedbyX-rayirradiationandthefeasibilityofgene-radiotherapyforesophagealcarcinoma.METHODS:RecombinedplasmidpETNF-P16wasconstructedandtransfectedintoEC9706cellswithlipofectamine.ELISA,Westernblot,andimmunocytochemistrywereperformedtodeterminetheexpressionpropertiesofpETNF-P16inEC9706aftertransfectioninducedbyX-rayirradiation.RESULTS:EukaryoticexpressionvectorpETNF-P16wassuccessfullyconstructedandtransfectedintoEC9706cells.TNFαexpressionsweresignificantlyincreasedinthetransfectedcellsafterdifferentdosesofX-rayirradiationthaninthoseafter0Gyirradiation(1192.330-2026.518pg/mL,P<0.05-0.01),andtheTNFαexpressionsandP16weresignificantlyhigher6-48hafter2GyX-rayirradiation(358.963-585.571pg/mL,P<0.05-0.001).NoP16expressionwasdetectedinnormalEC9706cells.However,therewasstrongexpressioninthetransfectedandirradiationgroups.CONCLUSION:X-rayirradiationinductioncouldsignificantlyenhanceTNFαandP16expressioninEC9706cellstransfectedwithpETNF-P16plasmid.Theseresultsmayprovideimportantexperimentaldataandtherapeuticpotentialforgene-radiotherapyofesophagealcarcinoma.
简介:目的构建并鉴定C—erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体。方法体外合成含针对C—erbB-2特异基因序列的寡核苷酸,并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi—ReadypSIREN—RetroQ。结果构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶MIuI、BamHI、EcoRI切开,电泳可显示相应条带,经测序其序列与设计的一致。结论成功构建了C—erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体pRetroQ/C—erbB-2/siRNA-1、pRetroQ/C—erbB-2/siRNA-2、pSIREN—RetroQ/C—erbB-2/siR—NA-3,为进一步研究p185基因沉默奠定了基础。
简介:副词“时而”原本是“副词+连词”的非句法结构,先秦即已出现连用,因句法、语义等的变化跨界融合成词,清代突然成词并出现迭用格式“时而……时而”。这反映了词汇化的一般规律;但“时而”的成词同时还受到“有时而……有时而”格式的影响,而与“时……时”“有时……有时”格式没有直接关系,这是“时而”成词过程中的特异性。词汇化不都是单个、孤立、规则的现象,有的可能是一批、一类、甚至整个词汇系统间的相互系联、调整、互动和影响。
简介:摘要:生猪特异性皮疹病是一种常见的猪只传染病,目前尚无特效药物治疗。本文主要介绍了生猪特异性皮疹病的治疗原则和策略,包括提供良好的饲养环境和营养保障、加强病情观察和监测、严格隔离和生物安全措施,以及加强免疫管理。此外,针对并发感染和症状缓解,可以考虑使用抗生素和支持性治疗药物。然而,药物治疗只是治疗策略的一部分,预防措施和养殖管理是更为重要的控制手段。
简介:目的研究siRNA特异性靶向沉默Livin基因对人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞耐药性的影响。方法采用ADM低浓度梯度递增结合大剂量间歇诱导方法建立5-FU诱导的多药耐药细胞系,采用ATP生物荧光肿瘤体外药物检测技术(ATP-TCA)法检测细胞耐药性,采用免疫组织化学方法检测Livin蛋白在MCF-7耐药细胞株系中的表达情况,采用LivinSiRNA联合表柔吡星、5-氟尿嘧啶、多西他赛、健择诱导乳腺癌MDR细胞的凋亡。采用SPSS20.0处理数据,耐药情况、细胞的凋亡情况用(x珋±s)表示,采用t检验,当P〈0.05时差异具有统计学意义。结果结果显示,MCF-7多药耐药细胞存在多药耐药问题;联合组MCF-7增敏(19.48±12.00)μM、MCF-7/MDR增敏(35.62±2.37)μM,与转染组与加药组对比,数据差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论siRNA特异性靶向沉默Livin基因可增强人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞的敏感性,提高细胞凋亡率。