简介：摘要目的制备靶向甲型流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)蛋白的广谱抗体FHA3，并对其进行鉴定。方法依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，PCR扩增FHA3重链和轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FHA3。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FHA3。ELISA检测FHA3与甲型流感病毒HA的结合。假病毒感染宿主细胞试验检测抗体FHA3的体外中和活性。结果蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FHA3。FHA3与甲型流感病毒H1N1 HA、H2N2 HA、H3N2 HA、H5N1 HA、H7N9 HA以及H9N2 HA均识别结合，且呈浓度依赖效应。FHA3具有较好的体外中和活性，在低浓度下(5 μg/ml)能有效阻断H5N1以及H7N9假病毒入侵靶细胞，在0.012 5 μg/ml浓度下能有效阻断H1N1假病毒入侵靶细胞。结论获得1株具有体外中和活性的靶向甲型流感病毒HA蛋白的广谱抗体。

简介：摘要目的制备重组流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)三聚体蛋白疫苗并进行相关表征分析，研究重组HA三聚体在小鼠模型中的免疫原性。方法构建稳定表达HA三聚体蛋白的CHO细胞株，通过Western blot、单向免疫扩散试验、蛋白质粒径检测和N-糖基化位点分析对重组蛋白进行定性及定量分析。根据剂量、佐剂等处理条件的不同将BALB/c小鼠分为11个组，并进行一致的免疫程序。初次免疫后56 d检测血清中和抗体效价，以评价免疫原性。结果构建的CHO细胞株能够分泌表达HA三聚体。HA三聚体具备生物学活性能够在单向琼脂免疫扩散试验中形成沉淀环，蛋白质粒径大小约为18.79 nm，具有10个N-糖基化位点，包括高甘露糖型、复合糖型和杂合糖型；HA三聚体重组蛋白疫苗在2次免疫小鼠后，3.75 μg剂量配伍RFH01佐剂与对照组单价疫苗原液15 μg引起的中和抗体效价差异无统计学意义(P＝0.431 2，U＝36)，配伍佐剂组免疫后血清抗体效价均高于未加佐剂组，其中15 μg HA三聚体+RFH01组效价最高，为1 280。结论成功制备了流感病毒重组HA三聚体蛋白，其与RFH01佐剂配伍能够诱导BALB/c小鼠产生针对流感病毒的体液免疫应答，为流感病毒重组亚单位疫苗的研发提供了参考。

简介：【 摘要 】 目的：探讨 血清半乳糖血凝素 -1 、紧密连接蛋白 -1 对甲状腺癌病情评估的价值 。

简介：摘要目的探索含有流感病毒血凝素茎部α螺旋区（HAα）和6个串联重复M2蛋白胞外区域（6M2e）的融合蛋白的表达和制备方法，并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。方法采用去除高变区的鞭毛蛋白序列，将HAα和6M2e插入到原高变区位点，构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e。在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化和鉴定，并评估其细胞毒性。最后将制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，采用ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体效价，实时荧光PCR法检测小鼠IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-ɑ的mRNA水平，CCK-8法检测脾细胞的增殖。结果成功构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e，蛋白表达最适条件为1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）37 ℃诱导10 h，通过镍柱纯化获得高纯度的无毒融合蛋白。免疫小鼠后抗M2e-IgG和抗HAα-IgG的抗体ELISA效价均达到1∶102 400，且与对照组相比差异有统计学意义(t=0.33，P=0.774；t=7.60，P=0.001)。各类细胞因子的mRNA水平升高，其中实验组IFN-γ转录水平为38.74±3.65，蛋白水平为（66.03±3.31）pg/mL，高于对照组（t=21.33，P=0.003；t=10.21，P<0.01）。结论成功制备了高纯度的融合蛋白FljBΔD2D3-HAα-6M2e，能有效刺激小鼠产生抗M2e-IgG和抗HAα-IgG，具有良好的免疫效果，为流感疫苗候选物研发奠定了基础。

简介：摘要目的在原核系统中表达流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)头部蛋白并进行血清学分析。方法将H1N1和H3N2型流感病毒的HA头部蛋白编码基因克隆到pET-22b(+)原核表达质粒中，通过IPTG诱导，在大肠埃希菌BL21中获得含有HA头部与His-Tag的融合蛋白rH1N1-HA和rH3N2-HA。SDS-PAGE分析IPTG诱导前后的融合蛋白，验证表达的准确性，Western blot验证重组蛋白的表达。纯化重组蛋白，多剂次免疫家兔，获得针对H1N1-HA和H3N2-HA头部的多克隆抗体。同时，重组蛋白免疫BALB/c小鼠，评价其免疫原性。结果rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白在小鼠体内诱导了滴度高于40的血凝抑制抗体，可作为一种保护性抗原。rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白制备的多克隆抗体，可作为Western blot、ELISA等免疫学应用的重要材料。结论本研究制备的HA头部蛋白可作为一种保护性抗原，在小鼠体内诱导保护性抗体。HA头部制备的多克隆抗体，可用于甲型流感病毒的免疫学和血清学研究。

简介：摘要流感是一种严重危害公共健康的人畜共患呼吸道传染疾病，血凝素为甲型流感病毒包膜最主要的糖蛋白，病毒血凝素末端修饰的甘露聚糖可作为多种固有免疫系统识别的靶点。本文简述甲型流感病毒血凝素蛋白糖基化在固有免疫系统成分识别和抗病毒方面所起的作用。

简介：摘要目的分析2021—2022年流行季北京市首起乙型流感Victoria系（BV）疫情的病毒血凝素（HA）的基因变异和进化特征以及与流感疫苗株的匹配性。方法采集北京市朝阳区某小学乙型流感疫情流感样病例的咽拭子标本，提取核酸后利用二代测序技术进行测序分析。应用BioEdit分析HA基因的核苷酸和氨基酸变异位点，采用Mega 6.0软件中的NJ模式构建HA基因的遗传进化树并分析。结果通过二代测序获得了2株BV的HA基因全长序列。与本年度的疫苗株HA基因相比较，疫情株有9个氨基酸位点发生变异，其中6个变异位点位于3个不同的抗原决定簇。遗传进化树分析显示疫情株HA基因位于Clade 1A.3a2分支，与2021—2022年度北半球推荐的流感疫苗株（B/Washington/02/2019）不在同一分支。结论本起BV疫情毒株的HA基因在抗原表位发生多处变异，必需加强BV流感的监测与变异规律分析，为BV防控策略的制定提供有力的数据支撑。

简介：摘要目的揭示H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因氨基酸位点的变异情况并探讨其分子进化趋势。方法收集并比对EpiFlu数据库中2020年4月以前H9N2 AIV毒株HA基因序列信息，采用生物信息学的方法分析HA蛋白关键受体结合位点、裂解位点、糖基化位点的氨基酸差异。结果84.92%(4 067/4 809)序列HA226位点的谷氨酰胺(glutamine, Q)被亮氨酸(leucine, L)替代；来自禽类的序列发生HA-Q226 L突变的占84.75%(4 013/4 735)，来自哺乳动物的序列发生HA-Q226 L突变的占72.97%(54/74)；96.26%(4 629/4 809)序列HA蛋白裂解位点基序模式仍保持低致病性AIV的特点，但有180条来自禽类的序列HA蛋白裂解位点插入了2个碱性氨基酸；58.68%(2 822/4 809)序列新增1个或者2个潜在糖基化位点，而66.44%序列(3 195/4 809)丢失糖基化位点HA210-212。结论H9N2亚型AIV HA蛋白受体结合位点趋于结合人类受体，对哺乳动物的适应性增加，HA蛋白裂解位点和糖基化位点有向高致病性AIV的序列特征突变的倾向。

简介：摘要目的掌握2021年北京市流感流行特征及乙型Victoria系（简称BV）流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）基因、抗原性变异情况，为北京市流感防控提供科学依据。方法对北京市2021年1—11月流感病原学监测结果进行统计分析，并随机抽取15株BV流感病毒，通过HA基因扩增测序，分析其基因变异和进化特征。结果研究期间共收集流感样病例样本16 097份，其中核酸检测阳性208份，经型别鉴定BV流感病毒205份（98.56%）、乙型Yamagata（简称BY）系流感病毒3份（1.44%）。15株BV流感病毒HA基因序列与疫苗株B/Washington/02/2019相比，核苷酸相似度为98.39%~98.75%，氨基酸相似度为97.86%~98.40%。基因进化分析显示15株BV流感病毒均分布于Clade1A.3a2分支，与疫苗株相比存在多位点变异。15株BV流感病毒有11个糖基化位点。1株（6.6%）为疫苗株的低反应株。结论2021年北京市监测到的流感病毒中BV流感病毒占绝对优势，其HA基因位点多处发生变异，提示对该亚型变异的持续监测至关重要，为制定流感防控策略提供科学依据。

简介：摘要目的了解贵州省H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)的流行与遗传变异情况，为AIV的防控提供依据。方法统计2018年10月—2019年3月贵州省活禽市场外环境AIV检出情况，对选取的H9N2亚型AIV进行基因组的提取、血凝素(hemagglutinin, HA)基因的RT-PCR扩增与测序，并对获得的HA基因序列进行同源性、遗传进化和关键位点变异分析。结果贵州省活禽市场外环境AIV检出率为52.2%，H9N2占阳性的83.7%。H9N2亚型AIV HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为91.6%～100.0%和91.0%～100.0%，均属于Y280亚系，G57基因型；与致病性相关的裂解位点序列均为PSRSSRGLF和LSRSSRGLF，符合低致病性AIV的分子特征；与宿主特异性相关的受体结合关键位点存在H191N、E198T/A和Q234L三个位点的突变，具有人样受体结合特征；与毒力相关的糖基化位点均具有7个，其中因突变218位点均存在一个糖基化位点缺失，313位点均存在一个增加。与人感染毒株相比关键位点未发生重要突变。结论贵州省活禽市场外环境AIV检出率较高，污染较严重，且以H9N2为优势流行亚型；H9N2亚型AIV均属于Y280亚系，G57基因型，为低致病性AIV，毒株遗传差异在增大，关键氨基酸位点存在变异，具有感染人的风险，故应加强监测该病毒的分子遗传变异情况。

简介：摘要目的评价重组流感病毒H7N9血凝素(hemagglutinin，HA)亚单位疫苗在动物中的免疫效果。方法利用杆状病毒系统表达分泌型的HA片段，单独或联合Al(OH)3佐剂腹腔注射免疫BALB/c小鼠后，对小鼠进行H7N9毒株的攻击。分析重组H7N9 HA(rH7HA)的免疫保护效果。结果rH7HA加Al(OH)3佐剂与rH7HA单独免疫相比，在血清中诱导了更高的IgG滴度。最高剂量(1.500 μg)rH7HA加佐剂组诱导IgG滴度达215，单独诱导IgG滴度达213。但两者之间差异无统计学意义，说明免疫小鼠的rH7HA量达到1.5 μg即能够对同源病毒的感染提供保护。结论杆状病毒系统表达的分泌型HA通过腹腔注射能够保护小鼠抵抗致死性剂量的同源病毒的感染。

简介：摘要目的了解2018—2019年河北省流感流行特征，分析乙型流感病毒Victoria（BV）系毒株血凝素（HA）基因特征和变异情况。方法于2018年4月至2019年3月，在河北省28所国家级哨点医院采集发热3 d内的流感样病例（ILI）咽拭子标本，同时通过“中国流感监测信息系统”收集2018—2019年河北省ILI的监测数据。对ILI的咽拭子标本进行核酸检测、病毒分离，并选取不同地区的14株BV毒株进行HA基因测序，利用DNASTAR 7.0和Mega-X软件分析HA基因序列特征并构建进化树。结果2018—2019年，河北省28所国家级流感监测哨点医院共监测门、急诊病例总数为4 689 103例，ILI例数为 99 266例（2.12%）；共检测ILI样本18 730份，流感病毒核酸阳性2 752份（14.69%），检出高峰在2019年第3周（44.92%），流行前期以甲型H1N1为主，流行后期以BV为主。HA基因序列分析显示14株BV病毒均属于162-164位氨基酸缺失株，氨基酸同源性为97.16%~100%，与疫苗株B/Colorado/06/2017相比氨基酸同源性为97.16%~98.95%，涉及11个氨基酸位点突变。结论2018—2019年河北省流感冬、春季流行，BV流行毒株有多个抗原位点发生了变异，可能是引起暴发疫情的原因。

简介：摘要目的深入了解2017-2018年广州市流行的乙型流感病毒的基因特征，明确乙型流感病毒的变异和流行特点，与WHO推荐的疫苗株进行比对分析匹配度，为流感监测防控提供科学依据。方法将2017年12月至2018年4月从广州市流感监测哨点医院采集的乙型流感病例的咽拭子标本进行分离培养、核酸提取、逆转录-聚合酶链反应和序列测定，通过构建血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)分子进化树进行分析，并与疫苗株进行比较，分析临床株的变异情况。结果2017-2018年广州市Yamagata系和Victoria系的乙型流感病毒同时存在，Yamagata系活动水平较Victoria系高。Yamagata系所测病毒株与WHO推荐的2017-2018年乙型流感疫苗株B/Phuket/3073/2013有更近的亲缘性，且毒株的HA蛋白均携带L187Q和M266V的氨基酸突变，变异未涉及抗原决定簇，个别毒株存在其他位点发生突变的情况；Victoria系所测病毒株与WHO推荐的2017-2018年流感疫苗株B/Brisbane/60/2008亲缘性更近，且毒株的HA蛋白均携带I132V、N144D和A214T的氨基酸突变，变异涉及2个抗原决定簇，个别毒株存在其他位点发生突变的情况。同时，检测到1株BY-HA/BV-NA系间重配病毒。结论2017-2018年度的三价流感疫苗株未能对广州市人群形成良好的保护作用。

简介：摘要目的了解江苏省首例人感染H9N2亚型禽流感病例的流行病学特点和相应H9N2禽流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)基因特征。方法逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测不明原因急重症呼吸道感染病例咽拭子标本甲/乙型及各亚型流感病毒核酸。Sanger法对H9N2阳性标本进行病毒HA基因测序，与禽流感病毒数据库中的参考序列进行比对分析。构建HA基因系统进化树。结果苏州市疾病预防控制中心于2019年3月报告了江苏省首例人感染H9N2亚型禽流感病毒实验室确诊病例。HA基因序列分析表明苏州A/Suzhou/S683/2019(H9N2)病毒株为欧亚谱系Y280-like亚系分支，与A/chicken/Shanghai/S1171/2018 (H9N2)核酸序列同源性最高，为99.23%。HA蛋白裂解位点氨基酸序列为PSRSSR↓GLF，并且受体结合位点关键氨基酸中发生了Q226L突变。与F98疫苗株相比，该禽流感病毒HA潜在糖基化位点位置发生了一定程度的改变。结论苏州H9N2禽流感病毒仍为低致病性，但可能获得了适应人类宿主的部分能力。

简介：目的基于焦磷酸测序技术建立甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）基因裂解位点突变的快速检测方法．探讨其临床应用价值。方法采用RT-PCR扩增甲型H1N1病毒血凝素基因中的HA片段．在生物信息学分析的基础上，针对甲型H1N1病毒血凝素基因含有裂解位点序列片段．分别设计一套生物素标记的PCR引物和测序引物．运用焦磷酸测序技术对含甲型H1N1病毒裂解位点基因片段进行序列测定，同时分析青岛地区甲型H1N1流感病毒流行株的裂解位点基因特征。结果建立了基于焦磷酸测序技术检测甲型H1N1流感病毒裂解位点突变方法．实现甲型H1N1流感病毒HA基因裂解位点的高通量检测，青岛地区甲型H1N1流感病毒裂解位点344氨基酸序列没有发生变异。结论本研究所建立的方法具有自动化程度高和结果准确等特点，适用于甲型H1N1流感病毒裂解位点进行快速高通量检测。

简介：目的了解2012-2015年贵阳市B型流行性感冒（以下简称流感）病毒的变异和流行特点,分析其与WHO推荐的疫苗株和我国的代表株匹配情况。方法将21份标本进行血凝素基因片段1（haemagglutinin1,HA1）基因序列测定,通过DNAStarversion7.1等软件对测序产物进行分析。结果贵阳市B型流感病毒存在BY和BV两种谱系;核苷酸同源性显示,BV系与疫苗株B/Brisbane/60/2008的同源性为97.8%～99.3%;2013-2014年BY系与疫苗株B/Massachusetts/02/2012的同源性为96.2%～96.5%,与既往的疫苗株B/Wisconsin/01/2010同源性为99.0%～99.3%;2015年BY系与疫苗株B/PHUKET/3073/2013同源性为99.2%～99.5%;2012-2015年BV系与我国代表株B/Chongqing-Yuzhong/1384/2010同源性为96.8%～99.0%,BY系与种子疫苗株B/Hubei-Wujiagang/158/2009为98.2%～99.2%。与当年度疫苗株相比,2013-2014年BY系毒株有9个氨基酸位点发生变异,其中A134P位点涉及到抗原决定簇A区,N142K涉及到B区;2015年BY系毒株发生新的L198Q变异,且涉及到D区;BV系氨基酸位点替换多样,但很少涉及到抗原决定簇。结论2012-2015年贵阳市人群中B型流感病毒在不断地发生改变,除2013-2014年疫苗株与流行株匹配性不佳以外,其余年度的匹配性均较好,能起到保护作用。

简介：摘要探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型（HPIV-3）的感染情况，并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）基因特征。本研究为横断面研究，青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019 年12月期间，每月随机采集急性呼吸道感染（ARTI）儿科患者的咽拭子样本，总共1 674份，采用多重实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，筛查HPIV-3阳性样本。采用巢式PCR方法扩增HPIV-3阳性样本HN全长基因并进行序列测定，序列结果与GenBank中HPIV-3的代表株进行对比分析，建立系统进化树。结果显示，1 674份咽拭子样本中，HPIV-3阳性有90份，检出率为5.37%，其中，6岁以下儿童占97.78%（88份）。HPIV-3阳性病例主要分布在春季和夏季。通过巢式PCR方法扩增得到44株HPIV-3 HN基因全长序列，序列比对及进化分析表明，HPIV-3 HN基因属于C3基因亚型的C3a和C3b分支，其中，C3a亚型有30株，C3b亚型有14株。44株青岛分离株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.0%~100.0%和98.5%~100.0%。综上，2018至2019年间，HPIV-3 C3基因型的C3a和C3b分支在山东省青岛市地区循环流行，其HN基因型变异较小，进化上具有一定的地域特征。

简介：摘要目的了解流感样病例中临床细菌与H3N2流感病毒共感染及病毒血凝素(HA)裂解位点的变异特征。方法收集2013年1月至2018年12月的流感样病例样本12 250份，实时荧光PCR检测H3N2流感病毒。选取部分流感阳性病例样本，采用实时荧光PCR的方法进行金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌的检测，分析其临床感染特征。分离流感病毒，RT-PCR扩增病毒HA，测序，构建进化树，并分析裂解位点氨基酸变异特征。结果2013年以来，每年都有H3N2流感病毒的流行，H3N2在流感阳性病例中的占比为44.69%。随机选取2013—2018年间流感流行高峰的H3N2阳性病例样本295份，29.2%的病例存在临床细菌感染。对分离到的210株H3N2流感病毒进行HA裂解位点测序，68株存在变异，其中63株为K342R单氨基酸位点变异，裂解位点由PEKQTR转变为PERQTR。裂解位点未变异样本的细菌共感染率为31.25%(45/144)，裂解位点变异样本的细菌感染率为23.53% (16/68)，二者的差异没有统计学意义(χ2＝1.34，P>0.05)。杭州地区流行的H3N2流感病毒主要属于3C.3a和3C.2a两个进化簇，裂解位点发生K342R变异的病毒属于3C.3a进化簇。结论H3N2流感病毒在杭州地区的流感病毒流行中占据重要地位。流感阳性病例存在着一定程度的细菌共感染。裂解位点变异具有一定的地域流行特征，但与细菌共感染没有显著相关性。

简介：摘要目的研制用于H7N9禽流感病毒诊断的血凝素线性B细胞抗原表位单克隆抗体。方法采用H7N9禽流感病毒血凝素特异性线性B细胞抗原表位免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤细胞技术和间接ELISA法筛选、鉴定获得稳定分泌抗H7N9禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株；通过SDS-PAGE、间接ELISA和斑点免疫印迹技术鉴定其亚型、效价、纯度等生物学特征。结果共获得2株单克隆抗体（7C8H8和8E9E2），其中7C8H8抗体亚类为IgG2a，腹水抗体效价>1∶512 000，且可以特异性结合H7N9禽流感病毒血凝素。8E9E2仅具有较低的H7N9禽流感病毒血凝素蛋白结合力。结论获得1株可分泌高效价、高特异性的抗H7N9禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株7C8H8。

简介：目的：采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增，对获得的基因进行序列分析，并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法：设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物，对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序，与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果：巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因，并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论：建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法，为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础，并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。