简介:目的:利用Adeasy-1系统,构建并鉴定CARP基因重组腺病毒载体.方法:PCR扩增含有CARP全长cDNA的片段,经测序验证无误后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的重组质粒,再在293细胞中进行包装扩增,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:测序证实PCR产物为CARP全长cDNA;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;转染293细胞3天后可见绿色荧光,回收病毒可以重复感染293细胞,证明病毒包装成功.
简介:摘要目的构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体。方法应用RT-PCR方法从小鼠脑组织中扩增分离CXCR3基因,经双酶切位点插入腺病毒载体pacAd5中,经氨苄青霉素抗性筛选、酶切及DNA测序方法验证目的基因。采用Lipofectamine?2000将重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞,包装、扩增后测定病毒滴度。结果RT-PCR方法获得1.1Kb目的基因CXCR3,经氨苄青霉素抗性筛选的重组克隆经酶切及DNA测序证实为目的基因。重组CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞后获得包装及扩增,病毒滴度达1.8×108PFU/ml。结论本研究成功构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5,可用于进一步研究CXCR3参与多种疾病转归的分子免疫机制。
简介:摘要目的研究嵌合腺病毒35型载体和痘苗病毒载体SIVenvT疫苗通过不同策略联合免疫小鼠所诱导的细胞和体液免疫应答。方法通过PCR和Western blot方法对表达SIV mac239株SIVenvT基因的重组嵌合腺病毒35型(rAd5F35-SIVenvT)和重组痘苗病毒安卡拉株(rMVA-SIVenvT)进行体外鉴定。采用两种不同的策略联合免疫BALB/c小鼠,即同源载体免疫和异源载体免疫。通过ELISPOT方法检测小鼠脾脏中分泌SIV Env特异性IFN-γ的淋巴细胞数量,ELISA方法检测血清SIV gp120抗体滴度,比较两种免疫策略诱导小鼠产生细胞和体液免疫应答的差异。结果rAd5F35-SIVenvT和rMVA-SIVenvT均能在HEK293细胞中有效表达SIVenvT蛋白。初次免疫后第4周,两组SIV Env特异性细胞免疫应答和SIV gp120抗体均达到峰值,随后呈波动下降趋势。异源免疫组诱导小鼠的应答水平高于同源组,其中第4周和第16周异源组细胞免疫应答强度显著高于同源组,第4周异源组SIV gp120抗体滴度显著高于同源组。结论rAd5F35-SIVenvT和rMVA-SIVenvT两种载体疫苗联合免疫策略能诱导小鼠产生较强细胞和体液免疫应答。
简介:目的:构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20,检测体外转染小鼠结肠癌细胞CT-26后的产物表达。方法:通过EcoRI/SalI双酶切CCL20质粒和pDC316质粒,将获取编码CCL20的基因片段连接到pDC316重组穿梭质粒。将测序正确的穿梭质粒pDC316-CCL20与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共同转染293T细胞,构建重组腺病毒载体Ad5-CCL20。予Ad5-CCL20体外转染结肠癌细胞CT-26,Westernblotting和Elisa检测转染后不同时间段CCL20的表达情况,并以含CCL20的上清分别对mDC、iDC进行趋化实验。结果:成功构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20;Westernblotting和Elisa均检测到CCL20表达,且CCL20表达量随病毒转染CT-26细胞的时间延长而逐渐增加;趋化实验表明,趋化因子CCL20对iDC、mDC都有趋化作用,但对iDC的趋化作用更加明显(P〈0.05)。结论:重组腺病毒载体Ad5-CCL20的构建及获取为后续开展肿瘤的免疫治疗提供实验基础。
简介:【摘要】目的:利用Meta分析的方法探讨非复制型病毒载体(VVnr)新冠疫苗接种不良反应情况。方法:电子检索PubMed、Embase、中国知网、万方、维普检索有关VVnr新冠疫苗安全性和不良反应的随机对照试验研究,检索年限为2019年12月至2023年6月。应用Stata 14.0 软件进行Meta分析。结果:共纳入4篇文献9项RCT研究。结果表明在局部不良反应方面,与安慰剂对照相比,接种VVnr新冠病毒疫苗更容易引起接种部位肿胀(OR=5.62[1.92-16.43])、疼痛(OR=12.56[5.80-27.23])、瘙痒(OR=10.56[1.36-81.95])、硬结(OR=4.74[1.05-21.44])、红斑(OR=2.97[1.73-5.10])等不良反应;但在接种部位发红方面(OR=2.25[0.35-14.38]),差异无统计学意义。在全身不良反应方面,与安慰剂对照相比,接种VVnr新冠病毒疫苗更容易引起头痛(OR= 3.14[1.89-5.23])、恶心(OR= 1.33[1.09-1.63])、乏力(OR= 4.43[2.42-8.11])、食欲减退(OR=3.55[1.43-8.83])、全身肌肉酸痛(OR=8.59[2.29-32.27])、全身红斑(OR=6.06[2.48-14.83])、发热(OR=6.35[2.52-15.96]);但在呕吐、腹泻、咳嗽、全身瘙痒等方面,差异无统计学意义。结论:相较于安慰剂,接种VVnr新冠病毒疫苗更容易引起局部和全身不良反应。
简介:【摘要】目的:利用Meta分析的方法探讨非复制型病毒载体(VVnr)新冠疫苗接种不良反应情况。方法:电子检索PubMed、Embase、中国知网、万方、维普检索有关VVnr新冠疫苗安全性和不良反应的随机对照试验研究,检索年限为2019年12月至2023年6月。应用Stata 14.0 软件进行Meta分析。结果:共纳入4篇文献9项RCT研究。结果表明在局部不良反应方面,与安慰剂对照相比,接种VVnr新冠病毒疫苗更容易引起接种部位肿胀(OR=5.62[1.92-16.43])、疼痛(OR=12.56[5.80-27.23])、瘙痒(OR=10.56[1.36-81.95])、硬结(OR=4.74[1.05-21.44])、红斑(OR=2.97[1.73-5.10])等不良反应;但在接种部位发红方面(OR=2.25[0.35-14.38]),差异无统计学意义。在全身不良反应方面,与安慰剂对照相比,接种VVnr新冠病毒疫苗更容易引起头痛(OR= 3.14[1.89-5.23])、恶心(OR= 1.33[1.09-1.63])、乏力(OR= 4.43[2.42-8.11])、食欲减退(OR=3.55[1.43-8.83])、全身肌肉酸痛(OR=8.59[2.29-32.27])、全身红斑(OR=6.06[2.48-14.83])、发热(OR=6.35[2.52-15.96]);但在呕吐、腹泻、咳嗽、全身瘙痒等方面,差异无统计学意义。结论:相较于安慰剂,接种VVnr新冠病毒疫苗更容易引起局部和全身不良反应。