简介：目的探讨微小RNA-20a（miR-20a）对宫颈癌SiHa细胞迁移、侵袭和增殖的影响及可能机制。方法采用Lipofectamine2000脂质体法将miR-20a抑制剂和阴性对照载体分别转染SiHa细胞株。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测两组细胞中miR-20a的表达以验证转染效果,细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验及MTT法分别检测miR-20a的表达抑制对SiHa细胞迁移、侵袭和增殖的影响;荧光素酶报告实验及Westernblotting验证miR-20a对下游预测靶基因自噬相关蛋白7（ATG7）的调控作用。结果QPCR检测结果显示,与阴性对照组比较,miR-20a抑制剂组SiHa细胞中miR-20a的表达量显著降低（P〈0.01）,证明转染模型构建成功。细胞迁移实验显示,转染48h后,阴性对照组细胞的划痕愈合率为（75.68±5.94）%,高于抑制剂组的（38.24±7.68）%（P〈0.01）。Transwell细胞侵袭实验显示,转染48h后,阴性对照组穿膜细胞数为（96.35±10.23）个,多于抑制剂组的（23.54±7.26）个（P〈0.01）。MTT法检测显示,阴性对照组和抑制剂组细胞增殖能力的差异无统计学意义（P〉0.05）。与阴性对照组相比,转染miR-20a模拟物＋ATG7野生型3’UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性显著下降（P〈0.01）,而转染miR-20a模拟物＋ATG7突变型3’UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性无显著变化（P〉0.05）;Westernblotting检测显示,与阴性对照组比较,抑制剂组细胞ATG7蛋白表达量显著增加（P〈0.01）。结论降低miR-20a的表达能显著抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力,但细胞增殖能力不受影响,这可能与miR-20a直接作用于其下游靶基因ATG7并调控其表达紧密相关。

简介：摘要目的探讨砷诱导内质网应激致肝细胞凋亡过程中微小RNA-153（miR-153）表达变化及调控组蛋白H3第4位赖氨酸（H3K4）甲基转移酶（SET7/9）和组蛋白H3K4一甲基化（H3K4me1）水平变化的机制。方法体外培养人正常肝细胞（L-02细胞），根据不同处理方式分为对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+ miR-153上调和砷+ miR-153下调组，其中砷+阴性转染、砷+ miR-153上调和砷+ miR-153下调组转染质粒与转染试剂均按照3 μg∶8 μl进行转染。24 h后，砷处理、砷+阴性转染、砷+ miR-153上调和砷+ miR-153下调组再以100 μmol/L亚砷酸钠（NaAsO2）作为终浓度处理24 h；对照组加入与NaAsO2等体积的磷酸盐缓冲液（PBS）处理24 h。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组细胞miR-153表达水平；流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况；实时无标记细胞动态分析（RTCA）仪检测细胞增殖情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞内质网标志蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、SET7/9及H3K4me1蛋白表达水平。结果各组细胞miR-153表达水平比较，差异有统计学意义（F = 10.73，P < 0.05）。与对照组[（41.10 ± 6.08）%]比较，砷处理组miR-153表达水平[（4.35 ± 0.20）%]明显降低（P < 0.05）；与砷+阴性转染组[（10.00 ± 2.40）%]比较，砷+ miR-153上调组miR-153表达水平[（157.70 ± 42.70）%]明显升高（P < 0.05），砷+ miR-153下调组miR-153表达水平[（4.20 ± 0.28）%]明显降低（P < 0.05）。各组细胞总凋亡率、G1期细胞比例比较，差异有统计学意义（F = 29.69、104.32，P均< 0.05）。与对照组比较，砷处理、砷+ miR-153上调、砷+ miR-153下调组细胞总凋亡率、G1期细胞比例明显升高（P均< 0.05）；与砷+阴性转染组比较，砷+ miR-153上调组细胞总凋亡率、G1期细胞比例明显下降（P均< 0.05），砷+ miR-153下调组细胞总凋亡率、G1期细胞比例明显升高（P均< 0.05）。各组细胞增殖率比较差异有统计学意义（F = 799.35，P < 0.05）。与对照组比较，砷处理、砷+ miR-153上调、砷+ miR-153下调组细胞增殖率明显下降（P均< 0.05）；与砷+阴性转染组比较，砷+ miR-153上调组细胞增殖率升高（P < 0.05），砷+ miR-153下调组细胞增殖率下降（P < 0.05）。各组细胞SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平比较，差异有统计学意义（F = 78.52、52.13、54.32，P均< 0.05）。与对照组比较，砷处理组SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平明显升高（P均< 0.05）；与砷+阴性转染组比较，砷+ miR-153上调组SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平明显下降（P均< 0.05），砷+ miR-153下调组SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平明显升高（P均< 0.05）。结论miR-153在砷诱导内质网应激致肝细胞凋亡过程中具有重要作用，其表达和调控与SET7/9和H3K4me1水平变化有关。

简介：摘要目的观察微小RNA-200c(miR-200c)在人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法应用流式细胞术(FACS)在人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出以CD24＋CD44＋ESA＋作为标志物的胰腺癌干细胞。将miR-200c前体片段和阴性对照片段分别转染到胰腺癌干细胞中。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)和miR-200c的表达。Transwell试验检测细胞的侵袭能力。采用t检验。结果人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出CD24+CD44+ESA+细胞(0.8%)。miR-200c在胰腺癌干细胞中的相对表达值(0.15±0.01)显著低于PANC-1细胞(1.00±0.09)，差异有统计学意义(t＝3.306，P<0.05)。胰腺癌干细胞平均穿膜细胞数[(321.00±7.62)个]明显高于PANC-1细胞[(70.00±16.47)个]，差异有统计学意义(t＝2.152，P<0.05)。转染miR-200c前体片段24 h后的胰腺癌干细胞中miR-200c的相对表达值(3.70±0.42)明显高于转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中miRNA-200c的相对表达值(0.22±0.21)，差异有统计学意义(t＝2.073，P<0.05)。E-cadherin、vimentin、ZEB1 mRNA在转染miRNA-200c前体片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(3.12±0.02)×10-4、0.36±0.15、(0.38±0.07)×10-4，在转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(1.31±0.05)×10-4、1.16±0.08、(1.13±0.03)×10-4，两组比较差异有统计学意义(t＝1.941、2.165、2.308，P<0.05)。转染miR-200c前体片段后的胰腺癌干细胞的平均穿膜细胞数[(80.00±5.35)个]明显低于转染阴性对照片段的干细胞[(310.00±19.41)个]，两组比较差异有统计学意义(t＝2.613，P<0.05)。结论miR-200c过表达可以抑制胰腺癌干细胞的上皮-间充质转化，逆转其侵袭能力。

简介：摘要目的探讨在人肝癌细胞中微小RNA(microRNA，miR)-384对己糖激酶2(HK2)的调节机制。方法应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测43例肝癌组织及癌旁组织中miR-384和HK2基因的表达水平，分为肝癌组织组及癌旁组织组；利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-384与HK2 3’端非编码区(3’UTR)的具体结合位点，分为miR-384模拟物(mimics)组，空白对照(NC)组和HK2短发夹核糖核酸(shRNA)组；利用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验观察miR-384和HK2对肝癌细胞HepG2(购自中国科学院上海细胞库)增殖能力的影响；采用挽救实验进一步验证HK2基因是否可以逆转miR-384对HepG2细胞增殖的调控作用。两样本均数间比较采用t检验。结果肝癌组miR-384表达水平低于癌旁组织组(0.42±0.07比1.11±0.06，t＝18.210，P<0.01)，差异有统计学意义，肝癌组HK2含量高于癌旁组织组(2.02±0.15比1.51±0.13，t＝13.320，P<0.01)，差异有统计学意义；miR-384 mimics与HK2 3’UTR-wt共转染组荧光素酶活性低于对照组(0.34±0.03比0.21±0.01，t＝12.140，P<0.05)，差异有统计学意义。而miR-384 mimics与HK2-3’UTR-mut共转染组荧光素酶活与对照组比较，差异无统计学意义(0.22±0.03比0.21±0.01，t＝1.140，P> 0.05)。转染miR-384 mimics组HK2的mRNA表达水平低于对照组(1.62±0.17比2.11±0.12，t＝6.304，P<0.01)，差异有统计学意义。CCK-8实验分析结果显示，miR-384 mimics组HepG2细胞的增殖能力低于对照组(0.82±0.07比1.31±0.11, t＝2.941，P<0.01)，差异有统计学意义。同样，HK2 shRNA组HepG2细胞的增殖能力也低于对照组(0.85±0.07比1.32±0.11，t＝2.424，P<0.01)，差异有统计学意义。miR-384 mimics和HK2过表达质粒共转染组HepG2细胞的增殖能力与NC组比较，差异无统计学意义(1.32±0.02比1.32±0.14, t＝1.040，P>0.05)。结论miR-384可通过靶向调控HK2的表达，抑制HepG2细胞的增殖能力。

简介：无

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-646/CXC型趋化因子配体10(CXCL10)轴对肝癌侵袭的影响并探讨其分子机制。方法选取2018年6月到2020年1月南阳市中心医院收集的108例肝癌组织和对应癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-646表达水平。采用Lipofectamine 2000转染miR-646 mimic和对照mimic至肝癌细胞MHCC97H，转染48 h后采用Transwell分析细胞侵袭能力；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-646的靶基因，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞和肿瘤组织中CXCL10蛋白表达水平。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.10±0.19)比较，肝癌组织中miR-646表达水平(0.44±0.17)显著下调，差异有统计学意义。与对照组细胞[(108.55±12.35)个]比较，实验组细胞侵袭数量[(45.36±8.99)个]显著下调，差异有统计学意义。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示CXCL10是miR-646的靶基因。与癌旁组织(0.68±0.10)比较，肝癌组织中CXCL10表达水平(1.33±0.21)显著上调，差异有统计学意义。与对照组细胞(0.54±0.11)比较，实验组细胞表CXCL10表达水平(0.21±0.09)显著下调，差异有统计学意义。与癌旁组织基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平(0.85±0.19和0.58±0.18)比较，肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达水平(1.75±0.25和1.49±0.18)显著增加，差异有统计学意义。与对照组细胞MMP-2和MMP-9表达水平(1.24±0.14、1.16±0.18)比较，实验组细胞MMP-9和MMP-2表达水平(0.37±0.12、0.18±0.08)显著下调，差异有统计学意义(t＝3.018、5.091，P<0.05)。结论miR-646通过靶向CXCL10调节肝癌细胞的侵袭能力。

简介：摘要目的探讨环状RNA锌指蛋白652(circZNF652)/微小RNA(miR)-1278/叉头盒P1蛋白(FOXP1)轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞活性、增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测circZNF652、miR-1278以及FOXP1 mRNA表达；细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞活性；EdU实验检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞侵袭；蛋白质印迹法(Western blot)实验检测FOXP1蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验和RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证circZNF652与miR-1278之间的靶向关系，以及miR-1278与FOXP1之间的靶向关系。以t检验或单因素方差分析进行统计分析。结果ESCC细胞系KYSE-510和TE-10中circZNF652、FOXP1 mRNA和蛋白表达高于正常食管上皮细胞HEEC(3.37±0.24比1.97±0.06、4.38±0.29比2.88±0.12、2.95±0.25比1.48±0.12)，差异有统计学意义(F＝209.4、267.3、75.5，P<0.05)，而KYSE-510和TE-10中miR-1278表达低于HEEC(0.47±0.06比0.71±0.03)，差异有统计学意义(F＝152.5，P<0.05)。circZNF652小干扰RNA(si-circZNF652)组的细胞活性、增殖和侵袭能力低于阴性对照小干扰RNA(si-NC)组，差异有统计学意义(0.44±0.04比0.71±0.03、0.50±0.04比1.05±0.05、0.46±0.05比1.01±0.07)，差异有统计学意义(F＝1.5、1.3、2.1，P<0.05)；而si-circZNF652组的细胞凋亡率高于si-NC组[(30.2±0.28)%比(5.20±1.27)%]，差异有统计学意义(F＝2.3，P<0.05)。miR-1278拮抗剂(抗miR-1278)组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于阴性对照拮抗剂(抗NC)组(1.02±0.03比0.71±0.03、1.38±0.04比1.04±0.05、1.51±0.06比0.99±0.04)，差异有统计学意义(F＝484.1、306.1、190.6，P<0.05)，而si-circZNF652+抗miR-1278组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于si-circZNF652+抗NC组(0.57±0.02比0.35±0.02、0.89±0.04比0.49±0.02、0.88±0.04比0.52±0.06)，差异有统计学意义(F＝484.1、306.1、190.6，P<0.05)。miR-1278 mimic+FOXP1过表达(OE-FOXP1)组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于miR-1278 mimic+FOXP1过表达阴性对照(OE-NC)组(0.52±0.07比0.23±0.04、0.92±0.03比0.46±0.05、0.91±0.05比0.53±0.04)，差异有统计学意义(F＝35.9、242.7、237.5，P<0.05)，但miR-1278 mimic+OE-FOXP1组的细胞凋亡率低于miR-1278 mimic+OE-NC组(17.35±1.77比33.95±4.88)，差异有统计学意义(F＝66.1，P<0.05)。结论circZNF652通过抑制miR-1278提高FOXP1的表达，进而促进ESCC细胞增殖和侵袭能力，并降低细胞凋亡率。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) MT1JP靶向微小RNA(miR)-18a-5p对非小细胞肺癌恶性细胞生物学的影响。方法选择2018年6月到2021年6月河南省人民医院收治的71例非小细胞肺癌和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA MT1JP和miR-18a-5p表达水平。采用对照慢病毒和lncRNA MT1JP慢病毒感染A549细胞，建立lncRNA组和MT1JP组细胞，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和EdU染色分析两组细胞增殖；采用Transwell分析两组细胞侵袭；采用划痕实验分析两组细胞迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA MT1JP的靶基因。组间比较采用t检验。结果癌旁组织lncRNA MT1JP表达水平(1.00±0.17)明显高于肺癌组织lncRNA MT1JP表达水平(0.37±0.18)，差异有统计学意义(t＝21.330，P<0.05)。癌旁组织miR-18a-5p表达水平 (1.08±0.18)明显低于肺癌组织lncRNA MT1JP表达水平(2.23±0.20)，差异有统计学意义(t＝36.040，P<0.05)。lncRNA组细胞活力(1.67±0.09)和细胞EdU染色阳性率[(61.83±4.88)%]明显高于MT1JP组细胞活力(1.10±0.05)和细胞EdU染色阳性率[(33.17±3.31)%]，差异有统计学意义(t＝12.940、10.760，P<0.05)。miR-NC组细胞活力(1.63±0.06)和EdU染色阳性率[(61.33±4.46)%]明显高于miR-18a-5p沉默组细胞活力(1.14±0.09)和和EdU染色阳性率[(33.00±4.73)%]，差异有统计学意义(t＝10.760、10.680，P<0.05)。lncRNA组细胞划痕愈合率[(70.22±3.41)%]和侵袭数量[(111.83±10.09)个]明显高于MT1JP组[(35.42±3.82)%]和侵袭数量[(64.17±7.81)个]，差异有统计学意义(t＝16.620、9.153，P<0.05)。miR-NC组划痕愈合率[(73.72±3.82)%]和侵袭数量[(117.33±7.79)个]明显高于miR-18a-5p沉默组[(43.40±4.70)%]和侵袭数量[(56.67±10.29)个]，差异有统计学意义(t＝10.540、11.520，P<0.05)。结论lncRNA MT1JP在非小细胞肺癌中低表达，通过靶向miR-18a-5p，进而参与非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭等过程。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) LINC01234对前列腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其分子机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测收集2017年5月至2018年7月郑州大学第一附属医院收治的20例前列腺癌患者的前列腺癌组织及癌旁组织中LINC01234、微小RNA(miRNA，miR)-940的表达水平。分别将LINC01234小干扰RNA(si-LINC01234)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、微小RNA-940模拟物(miR-940 mimics)、阴性对照基因(miR-NC)、si-LINC01234＋阴性对照(anti-miR-NC)、si-LINC01234＋微小RNA 940特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-940)转染至DU145细胞。分别记作si-NC、si-LINC01234、miR-NC、miR-940、si-LINC01234＋anti-miR-NC、si-LINC01234＋anti-miR-940组。噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活性；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；Transwell法检测各组细胞的迁移及侵袭；双荧光素酶报告实验验证LINC01234与miR-940的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果LINC01234在前列腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(1.00±0.08比2.61±0.25，t＝27.430，P<0.05)，miR-940在前列腺癌组织中的表达水平低于癌旁组织(1.00±0.09比0.56±0.05，t＝19.112，P<0.05)，差异有统计学意义；转染si-LINC01234、miR-940 mimics后细胞活力显著降低(1.29±0.11比0.71±0.06；1.24±0.09比0.79±0.07，t＝13.886，P<0.05)，迁移细胞数[(84.36±8.12)个比(39.41±4.22)个；(86.25±8.14)个比(44.37±4.48)个]与侵袭细胞数[(67.25±6.74)个比(28.44±3.58)个；(69.48±6.25)个比(33.47±4.18)个]显著减少(t＝14.735、15.309，P<0.05)，细胞凋亡率[(6.58±0.61)%比(20.36±2.14)%；(7.11±0.71)%比(18.26±1.36)%]显著升高(t＝18.577，P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实miR-940过表达可抑制野生型(WT)-LINC01234细胞的荧光活性，LINC01234可负向调控miR-940的表达(t＝328.298，P<0.05)，差异有统计学意义；干扰miR-940表达可逆转抑制LINC01234表达对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其对凋亡的促进作用。结论lncRNA LINC01234可能通过靶向miR-940促进前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭，抑制细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨ST8SIA6-AS1靶向结合微小RNA(microRNA，miR)-142-3p，影响肝细胞癌的增殖和侵袭能力。方法用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)验证ST8SIA6-AS1在肝细胞肝癌(HCC)和邻近正常组织中的差异表达。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ST8SIA6-AS1和miR-142-3p在组织水平和细胞水平的表达量。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测人肝癌细胞Hep3B的增殖情况；采用迁移侵袭实验(Transwell法)检测肝癌Hep3B细胞迁移和侵袭情况。生物信息学、双荧光素酶报告实验验证ST8SIA6-AS1与miR-142-3P的靶向关系。组间采用t检验，多组间采用单因素方差分析进行比较，相关性分析采用Spearman秩检验。结果GEPIA结果显示ST8SIA6-AS1在肝癌组织中的表达明显高于正常组织。RT-qPCR结果显示ST8SIA6-AS1在HCC中的表达明显高于癌旁组织(0.778±0.363比1.951±0.575，t＝11.370，P<0.05)，差异有统计学意义。miR-142-3p在肝癌组织的表达量显著低于癌旁组织(0.881±0.374比0.371±0.164，t＝9.395，P<0.05)，差异有统计学意义。ST8SIA6-AS1在4种人HCC细胞株(HepG2、SMMC-7721、HCCLM3和Hep3B)的表达(3.84±0.27、5.81±0.60、4.47±0.55、5.94±0.69)明显高于正常肝细胞株L02(1.00±0.09，t＝17.280，t＝13.730，t＝10.780，t＝12.300，P<0.05)，差异有统计学意义，ST8SIA6-AS1在敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞中的相对表达量低于对照组(0.26±0.04比1.00±0.01，t＝9.423，P<0.05)，差异有统计学意义。集落形成实验结果显示，敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞集落个数显著低于对照组[(32.60±6.70)个比(100.00±10.00)个，t＝10.040，P<0.05]，差异有统计学意义；CCK-8实验中敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞72 h吸光度(A)值低于对照组[(0.71±0.06)%比(1.14±0.09)%，t＝6.886，P<0.05]，差异有统计学意义。Transwell实验结果显示敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞垂直迁移率明显低于对照组[(53.38±6.49)%比(100.00±13.00)%，t＝5.641，P<0.05]，差异有统计学意义。敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞的侵袭率低于对照组[(44.98±8.42)%比(100.00±10.00)%，t＝7.485，P<0.05]，差异有统计学意义。双荧光素酶报告实验证实miR-142-3p过表达组明显低于对照组ST8SIA6-AS1-野生型(WT)细胞的荧光活性，ST8SIA6-AS1负向调控miR-142-3p的表达(0.42±0.05比1.00±0.09，t＝9.757，P<0.05)。干扰ST8SIA6-AS1的表达可对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭产生抑制作用，这种作用可通过沉默miR-142-3p发生逆转。结论ST8SIA6-AS1可通过竞争性结合miR-142-3p在肝癌中发挥致癌作用。

简介：无

简介：摘要目的探讨circEIF4G2对婴幼儿血管瘤内皮细胞(HemECs)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法收集2015年8月至2019至11月于山西医科大学第二医院行手术治疗的27例婴幼儿血管瘤患者的瘤组织和瘤旁正常皮肤组织，HemECs购自上海钦诚生物科技有限公司，实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测组织和细胞中circEIF4G2和微小RNA-379-5p(miR-379-5p)表达。将HemECs分为si-NC、si-circEIF4G2、miR-379-5p、miR-NC、si-circEIF4G2+anti-miR-379-5p、si-circEIF4G2+anti-miR-NC组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖，Transwell检测各组细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证circEIF4G2和miR-379-5p调控关系。两组间比较采用独立样本t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两组间比较采用LSD-t检验。结果婴幼儿血管瘤组织中circEIF4G2表达高于正常皮肤组织(3.76±0.42比1.00±0.13，t＝ 32.619，P<0.05)，而miR-379-5p表达低于正常皮肤组织(0.46±0.07比1.00±0.12，t＝20.197，P<0.05)。HemECs中circEIF4G2表达高于正常血管内皮细胞(2.61±0.20比1.00±0.07，t＝22.794，P<0.05)，而miR-379-5p表达低于正常血管内皮细胞(0.41±0.03比1.00±0.09，t＝18.657，P<0.05)。si-circEIF4G2、si-NC组HemECs的吸光度(A)值分别为0.57±0.04、1.01±0.07，迁移数分别为(82.00±3.17)、(191.00±8.26)个，侵袭数分别为(61.00±3.11)、(132.00±7.73)个，si-circEIF4G2组各检测指标均低于si-NC组(t＝16.187、36.960、25.564，P均<0.05)。miR-379-5p组和miR-NC组HemECs的A值分别为0.61±0.05、1.11±0.09，迁移数分别为(94.00±5.10)、(187.00±6.10)个，侵袭数分别为(71.00±4.27)、(138.00±8.10)个，miR-379-5p组各检测指标均低于miR-NC组(t＝13.768、35.089、21.951，P均<0.05)。circEIF4G2靶向结合并负调控miR-379-5p表达。si-circEIF4G2+anti-miR-379-5p组和si-circEIF4G2+anti-miR-NC组HemECs的A值分别为1.04±0.09、0.58±0.05，迁移数分别为(184.00±10.02)、(86.00±4.10)个，侵袭数分别为(143.00±8.06)、(65.00±2.16)个，si-circEIF4G2+anti-miR-379-5p组各检测指标均高于si-circEIF4G2+anti-miR-NC组(t＝13.462、27.156、28.043，P均<0.05)。结论circEIF4G2在血管瘤组织和HemECs中呈高表达，下调其表达可能通过靶向负调控miR-379-5p抑制HemECs增殖、迁移和侵袭，其可能成为婴幼儿血管瘤治疗的分子靶点。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-598-3p靶向调控RNA聚合酶Ⅱ第五亚基调节蛋白(RMP)基因对人胃癌细胞SGC-7901恶性增殖和侵袭迁移的影响及其作用机制。方法筛选SGC-7901细胞株行后续实验，分别建立稳定过表达或敲减RMP和miR-598-3p的SGC-7901细胞株。采用溴脱氧尿苷(BrdU)、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力，平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，双荧光素酶报告基因法分析miR-598-3p的结合靶点，蛋白质印迹法(Western blot)检测相关通路相关蛋白表达水平，两样本间比较使用t检验。结果稳定过表达和敲减RMP或miR-598-3p的SGC-7901细胞株建立成功。敲减RMP能显著降低SGC-7901的增殖能力，BrdU(8.867±1.159比26.030±3.630，t＝7.704，P<0.01)，CCK-8(0.560±0.052比1.020±0.107，t＝6.708，P<0.01)，迁移能力(336.000±21.070比252.700±36.120，t＝3.452，P<0.05)，侵袭能力(36.330±7.371比127.300±10.690，t＝12.140，P<0.01)。过表达RMP能显著提高SGC-7901细胞的增殖能力，BrdU(56.400±6.560比24.800±4.423，t＝6.918，P<0.01)，CCK-8(2.105±0.142比1.028±0.110，t＝10.350，P<0.01)，迁移能力(131.300±20.110比257.000±29.140，t＝6.148，P<0.01)，侵袭能力(347.700±41.140比135.000±17.690，t＝8.226，P<0.01)。生物信息学预测miR-598-3p与RMP的3’端非编码区(3’UTR)位点结合，并通过双荧光素报告系统验证。过表达或敲减miR-598-3p能分别降低和提高SGC-7901细胞株的增殖、迁移及侵袭能力，而RMP的回复表达能挽救miR-598-3p引起的细胞增殖、侵袭及迁移的抑制。miR-598-3p通过靶向RMP抑制p70核糖体蛋白S6激酶(p70s6k1)/凋亡蛋白(Bad)和核因子-κB(NF-κB)通路发挥功能。结论miR-598-3p靶向RMP基因抑制p70s6k1/Bad和NF-κB通路降低SGC-7901细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) GSTM3TV2对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的影响，并探讨其与微小RNA(miR)-597的相互作用。方法选取郑州大学附属南阳市中心医院、南阳市宛城区第一人民医院和郑州大学第一附属医院2016年5月到2018年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁和肝癌组织中GSTM3TV2和miR-597表达水平；在肝癌细胞系HepG2建立lncRNA对照组和GSTM3TV2 KD组细胞系，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell和体内异体移植瘤实验检测GSTM3TV2的体内外功能；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析GSTM3TV2与miR-597的关系；将miRNA抑制剂转染HepG2细胞，分析其作用机制。计量数据比较采用t检验。结果肝癌组织中GSTM3TV2表达水平(2.96±0.34)明显高于癌旁组织(2.96±0.34)，差异有统计学意义(t＝4.819，P<0.05)。lncRNA对照组细胞48 h吸光度(A)值(2.17±0.22)明显高于GSTM3TV2 KD组(1.09±0.20)，差异有统计学意义(t＝3.429，P<0.05)。lncRNA对照组细胞侵袭数量[(154.82±13.83)个]明显高于GSTM3TV2 KD组[(87.29±10.43)个]，差异有统计学意义(t＝5.018，P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内成瘤体积[(1 048.45±251.30) mm3]明显大于GSTM3TV2 KD组[(759.49±142.09) mm3]，差异有统计学意义(t＝4.719，P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内肿瘤重量[(1.09±0.21) g]明显高于GSTM3TV2 KD组[(0.61±0.15) g]，差异有统计学意义(t＝3.185，P<0.05)。lncRNA对照组细胞淋巴结转移数量[(15.29±3.39)个]明显多于GSTM3TV2 KD组[(8.22±2.09)个]，差异有统计学意义(t＝3.103，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶活性结果显示miR-597是GSTM3TV2的靶基因。lncRNA对照组细胞miR-597表达水平(1.09±0.21)明显低于GSTM3TV2 KD组(2.80±0.26)，差异有统计学意义(t＝3.529，P<0.05)。结论lncRNA GSTM3TV2通过调节miR-597促进肝癌细胞增殖、侵袭和转移等恶性细胞生物学行为。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)靶向调控微小RNA(miRNA，miR)-106a-5p对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人肾癌ACHN、Caki-1、Caki-2和786-O细胞和正常肾脏上皮细胞HK-2中XIST的表达水平。将体外培养的Caki-2细胞分为Empty组(转染空白载体)和XIST组(转染XIST过表达载体)，采用RT-qPCR检测各组细胞中XIST和miR-106a-5p的表达水平，噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测各实验组细胞增殖和凋亡。采用双荧光素酶报告基因实验检测XIST和miR-106a-5p的靶向结合关系。将miR-106a-5p激动剂与XIST过表达质粒共转染后观察上调miR-106a-5p表达对XIST过表达的Caki-2细胞增殖和凋亡的影响。多组间比较使用单因素方差分析，组间多重比较采用学生纽曼·基尔斯(Student-Newman-Keuls，SNK)-q，两组间比较采用独立样本t检验。结果与HK2细胞比较，ACHN、Caki-1、Caki-2和786-O细胞中XIST的表达水平明显降低(相对表达量分别为0.516±0.031、0.605±0.021、0.241±0.024、0.355±0.042，t＝11.666、11.321、20.321、12.992，P均<0.05)。与Empty组比较，过表达XIST组细胞中XIST的表达水平升高(相对表达量为175.829±1.021，t＝20.471，P<0.05)、细胞增殖能力降低(为对照组0.759倍，t＝6.388，P<0.05)、细胞凋亡增加(为对照组1.304倍，t＝11.371，P<0.05)，而细胞中miR-106a-5p的表达水平明显降低(相对表达量为0.415±0.035，t＝13.717，P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p可与XIST靶向结合。转染miR-106a-5p激动剂成功上调miR-106a-5p表达后，过表达XIST对Caki-2细胞增殖的抑制作用及促凋亡作用明显逆转。结论过表达XIST可通过靶向调控miR-106a-5p抑制肾癌Caki-2细胞增殖并促进其凋亡。

简介：摘要目的观察长链非编码RNA(lncRNA)靶向微小RNA(miR)-130a-3p基因对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖及炎性因子分泌的影响。方法将中南大学湘雅医学院附属海口医院从2018年1月至2020年1月收治的OA患者30例纳入研究。分别采集OA以及正常软骨细胞，通过实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同软骨细胞中的lncRNA同源基因转录反义RNA(HOTAIR)以及miR-130a-3p表达水平。此外，于OA软骨细胞中转染siRNA-lncRNA HOTAIR或LV-lncRNA HOTAIR，采用细胞增殖实验(CCK-8)法完成细胞增殖情况的检测，并以RT-PCR法检测炎性因子分泌情况。计数资料以%表示，采用χ2检验。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验。结果OA软骨细胞中的lncRNA HOTAIR mRNA相对表达量为3.01±0.42，明显高于正常软骨细胞(1.08±0.23)，而miR-130a-3p mRNA相对表达量为0.48±0.11，明显低于正常软骨细胞(1.00±0.01)，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。转染si-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的增殖能力相较于转染si-NC组明显增加，而转染LV-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的增殖能力相较于转染LV-NC组显著下降，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。转染si-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的miR-130a-3p表达水平显著升高，而转染LV-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的miR-130a-3p表达水平显著下降，且经Pearson相关分析显示，在OA软骨细胞中，lncRNA HOTAIR和miR-130a-3p表达水平呈明显负相关关系，差异有统计学意义(r＝-0.912，P<0.05)。转染si-lncRNA HOTAIR后的OA软骨细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ) mRNA相对表达量分别为0.47±0.10、0.52±0.13，均明显低于转染LV-lncRNA HOTAIR后(0.88±0.19、0.93±0.15)，差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过靶向调控miR-130a-3p基因，继而影响OA软骨细胞的增殖，并具有一定的炎性反应调控作用。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-96通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)促进肺癌细胞增殖和迁移的作用。方法应用茎环反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-96在肺癌细胞株中的表达；干扰慢病毒感染抑制miR-96表达后，分别利用细胞增殖试验(CCK-8)和划痕试验检测其对肺癌细胞增殖和迁移的影响；蛋白质印迹法(Western blot)和双荧光素酶活性试验验证miR-96靶基因FOXO1。应用GraphPad Prism 5统计学软件进行分析，计量资料比较采用t检验。结果CCK-8实验显示抑制H1299细胞miR-96表达后，实验组24、48、72 h吸光度值分别为1.293±0.019、1.684±0.038、2.180±0.034，明显低于对照组的1.655±0.056、1.880±0.020、2.493±0.060，差异有统计学意义(t＝5.646、4.426、14.670，P<0.01)；划痕试验显示对照组4 h和10 h细胞迁移率为(29.21±3.96)%、(47.49±3.33)%，明显高于实验组[(5.80±2.94)%、(13.63±3.18)%]，差异有统计学意义(t＝4.748、7.352，P<0.01)；筛选miR-96靶基因FOXO1，将miR-96过表达后，肺癌细胞FOXO1表达明显降低；反之，抑制miR-96表达后，FOXO1表达明显增高。荧光素酶活性试验显示miR-96和FOXO1 3’非翻译区(3’UTR)野生型质粒共转染后，野生型为(22.5±7.6)%，与对照组的(97.2±13.2)%及突变型的(115.6±13.5)%比较，荧火虫/海肾荧光素酶比值明显降低(t＝14.750、12.040，P值均<0.01)。结论miR-96通过靶向调控FOXO1促进肺癌细胞增殖和迁移。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-29a-5p在心肌梗死后心室重塑心肌纤维化中的作用，探讨miR-29a-5p通过靶基因Endoglin调控心肌梗死后心肌纤维化的作用机制。方法选取2019年1月至2019年10月在郑州大学第二附属医院收治的30例心肌梗死患者和20例非急性冠脉综合征的患者，取血液标本，分别进行血清miR-29a-5p和NTPRO-脑钠肽(BNP)的检测。体内实验，建立小鼠心肌梗死模型，尾静脉分别注射miR-29a-5p mimics和阴性对照试剂。4周后处死小鼠，取部分心肌组织用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别对miR-29a-5p、Endoglin、BNP进行检测。体外实验，处死1日龄小鼠，分离获得心肌成纤维细胞并进行培养。将培养的细胞用脂质体2000对细胞进行转染miR-29a-5p mimics和阴性对照试剂，转染后加入50 μmol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)持续48 h。用图像J软件检测各组成纤维细胞的表面积。另取细胞用miR-29a-5p mimics或antagomir，pRL-TK-endoglin-3’端非编码区(3’UTR)载体，pGL3-basic质粒进行共转染。转染48 h，获得细胞，用双荧光素酶报告试验系统检测细胞相对荧光素酶活性，并用Real-time PCR和Western blot分别检测Endoglin在各组的表达。采用单因素方差分析和LSD检验。结果急性心肌梗死(AMI)患者血清中miR-29a-5p含量[(3.57±0.53) ng/ml]明显降低(F＝935.899，P<0.01)，NTPRO-BNP含量明显升高[(9.47±5.06) ng/ml，F＝65.440，P<0.01]。小鼠MI组miR-29a-5p表达水平明显降低(0.51±0.12，t＝4.315，P<0.01)，在AngⅡ诱导的心肌纤维化模型中同样发现miR-29a-5p的表达水平明显降低(0.65±0.26，t＝4.511，P<0.01)。miR-29a-5p mimics处理心肌成纤维细胞中Endoglin蛋白含量和mRNA表达水平降低(0.49±0.09，t＝352.312，P<0.01)，在miR-29a-5p antagomir处理心肌成纤维细胞中Endoglin蛋白含量和mRNA表达水平升高(2.15±0.14，t＝7.814，P<0.05)。结论miR-29a-5p是心肌纤维化的重要调节因子。

简介：摘要目的探讨LINC00261靶向调控微小RNA(miR)-219a-5p对脊髓损伤细胞模型凋亡和氧化应激的实验研究。方法体外培养PC12细胞，缺氧诱导PC12细胞模拟建立脊髓损伤模型，细胞分为NC组、模型组、pcDNA+模型组、pcDNA-LINC00261+模型组、anti-miR-NC+模型组、anti-miR-219a-5p+模型组、miR-NC+pcDNA-LINC00261+模型组、miR-219a-5p+pcDNA-LINC00261+模型组。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00261和miR-219a-5p的表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性。双荧光素酶实验验证LINC00261和miR-219a-5p的靶向关系。两组间比较采用t检验，多组间比较用单因素方差分析。结果与NC组比较，模型组内LINC00261表达水平(1.00±0.10比0.38±0.04)、SOD活性[(14.86±0.71) U/mg比(6.04±0.37) U/mg]、CAT活性高于NC组[(11.24±0.84) U/mg比(4.31±0.36) U/mg]，miR-219a-5p表达水平(1.00±0.11比2.43±0.17)、凋亡率[(8.24±0.61)%比(25.16±1.96)%]、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达(0.38±0.03比0.86±0.07)、MDA含量[(12.36±1.01) μmol/g比(32.75±2.38) μmol/g]、p-p65(0.41±0.03比0.83±0.08)、p-IκBα(0.35±0.03比0.69±0.06)蛋白表达显著增加，差异有统计学意义(t＝18.958，P<0.05)。过表达LINC00261或抑制miR-219a-5p能抑制脊髓损伤细胞模型细胞凋亡和氧化应激。LINC00261靶向负调控miR-219a-5p表达，过表达miR-219a-5p可以逆转过表达LINC00261对脊髓损伤细胞模型细胞凋亡、氧化应激的作用。与pcDNA+模型组比较，pcDNA-LINC00261+模型组内p-p65(0.85±0.07比0.43±0.04)、p-IκBα(0.71±0.07比0.38±0.03)蛋白表达低于pcDNA+模型组；与miR-NC+pcDNA-LINC00261+模型组比较，miR-219a-5p+pcDNA-LINC00261+模型组内p-p65(0.45±0.04比0.91±0.08)、p-IκBα(0.37±0.04比0.75±0.07)蛋白表达高于miR-NC+pcDNA-LINC00261+模型组，差异有统计学意义(t＝26.302，P<0.05)。结论LINC00261靶向调控miR-219a-5p/核因子-κB(NF-κB)轴减轻脊髓损伤细胞模型凋亡和氧化应激。

简介：摘要目的观察心肌梗死(MI)大鼠心肌微小RNA(miR)-130a-3p的表达及其对心肌炎症的影响。方法使用随机数字法将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、MI组、miR-130a-3p组(心肌注射miR-130a-3p mimics)和阴性对照组(心肌注射miR-130a-3p mimics阴性对照)，每组15只。心脏彩超测定左心室收缩末期内径(LVDs)、左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室长轴缩短分数(FS)、左心室射血分数(LVEF)；原位缺口末端标记法(TUNEL)法测定心肌凋亡指数；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β水平；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌组织miR-130a-3p、NOD样受体家族3炎症小体(NLRP3)的表达；蛋白质印迹法(Western blot)测定心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和NLRP3的表达水平。各组间比较采用方差分析。结果MI组miR-130a-3p水平明显低于Sham组(t＝4.365，P<0.05)。miR-130a-3p组大鼠LVDs和LVDd低于MI组(t＝4.475、5.172、P<0.05)，FS和LVEF高于MI组(t＝3.679、5.442，P<0.05)。miR-130a-3p组血清TnT、TnI、CK-MB、NT-proBNP、TNF-α、IL-1β水平明显低于MI组(t＝4.265、5.382、3.976、4.436、7.246、4.854，P<0.05)。Sham、MI、阴性对照组和miR-130a-3p组凋亡指数依次为(5.14±0.62)%、(34.54±4.37)%、(35.27±4.55)%和(18.76±2.48)%，miR-130a-3p组凋亡指数低于MI组(t＝4.356，P<0.05)。miR-130a-3p组NLRP3 mRNA和bax蛋白、NLRP3蛋白相对表达量均低于MI组(t＝6.296、11.356、8.235，P<0.05)，bcl-2蛋白水平相对表达量高于MI组(t＝8.876，P<0.05)。结论miR-130a-3p在MI大鼠心肌组织中呈低表达，上调miR-130a-3p表达可以减轻MI大鼠心肌炎症和细胞凋亡。