简介:【摘要】 目的 通过比较三种核酸提取方法,了解不同新冠病毒核酸提取方法的性能。方法采用核酸释放剂法、磁珠法和离心吸附柱法对10份浓度为500copies/ml的新冠病毒阳性质控品和58例新冠病毒核酸检测双阳性的鼻咽拭子样本进行核酸提取,提取后的核酸在同一品牌的荧光定量PCR扩增仪上,使用同一品牌的新冠病毒核酸扩增试剂进行RT-PCR扩增,对三种新冠病毒核酸提取方法的效果进行比较。结果 试验结果显示,离心吸附柱法核酸提取效率最高,磁珠法次之,核酸释放剂法最低。 结论 离心吸附柱法提取核酸的效果最好,但操作繁琐、耗时,适合对阳性结果的复核。其次是磁珠法,既可以满足临床要求,又可以实现自动提取,适合于大样本的检测。核酸释放法虽然节省了核酸提取步骤和操作时间,但在三种方法中核酸提取的效率最低。
简介:摘要 目的 了解新型冠状病毒样品混合提取对核酸检测结果的影响,探讨在日常检测工作中进行样品混合提取核酸的可行性。 方 法 将第三方阳性质控品单份(1组)与新型冠状病毒咽拭子阴性样品单份进行两两加样混提即2组、3组,用实时荧光RT—PCR技术检测原液和混合ORF-1ab基因和N基因,对三组进行数据分析。结果 1组与2组、3组对ORF-1ab基因和N基因相比,P值均大于0.05,无统计学意义 结论 2份样本混合提取对西安天隆磁珠法核酸提取试剂盒检测2019-nCoV是可行的,适合在日常工作中应用。
简介:【摘要】目的:分析应用RT-PCR法检测新冠病毒核酸出现假阳性结果的原因,并提出解决对策。方法:选择2020年6月15日至2021年6月30日40000例疑似新冠肺炎或新冠肺炎密切接触者的咽拭子样本进行研究,均应用RT-PCR法进行新冠病毒核酸检测,应用成都迈克生物试剂盒首检,对于首检阳性或疑阳性的样本用长沙圣湘生物试剂盒复检,总结假阳性样本数量及其原因。结果:40000例样本中初检阳性17例,复检阳性0例,阴性17例,即假阳性17例。假阳性样本中3例因结果判断失误所致,7例非特异性扩增因素所致,7例核酸污染因素所致的。结论:核酸污染、非特异性扩增、结果判断失误是新冠病毒核酸检测假阳性发生的主要原因,故需进一步完善PCR实验室质量控制,提高检验工作人员的规范操作,准确判断结果,以降低核酸检测假阳性率,为疫情防控提供更为可靠的诊断结果。
简介:摘要:目的 探析两类不同核酸提取方式对新型冠状病毒核酸检测室间质评样本的成果,开展效果对比。方法 搜集2022年广东省临床检验中心发放的新型冠状病毒核酸检测室间质量评估样本15份,运用两类常规核酸提取方式(磁珠法、核酸释放剂法)开展质评物复孔核酸提取与扩增。结果 依据广东省临床检验中心回馈,15份质评样本内,囊括9份新型冠状病毒阳性样本,6份阴性样本,分别复孔进行核酸提取与扩增,遂共18份阳性样本检测,12份阴性样本检测。磁珠提取法检出率为100%,释放剂法检出率为83.33%。取复孔的平均Ct值进行分析,磁珠法的OR1ab基因和N基因的Ct值均显著优于核酸释放剂法,差异具备统计学意义(P<0.05)。另两种方法OR1ab基因相差Ct值为(5.64±1.45 ),N基因相差Ct值为(4.46±1.28)。结论 不同核酸提取法对质评样本检验成果不同,核酸释放剂法的核酸提取效果有待提升。
简介:【摘要】:目的 对新冠病毒核酸检测方法与各环节要点展开分析探讨。方法 选取 2019年 12月 ~2020年 3月我院发热门诊收治的 7例新冠病毒疑似病例作为研究对象,均采用核酸检测方法进行临床检验。结果 取咽拭子样本及深部痰样本的病毒核酸检出率之间有明显差异,咽拭子样品中新冠病毒阳性检出率低于深部咳痰;普通棉签拭子的核酸检出率明显低于带病毒保存液的植绒拭子 (P<0.05)。结论 核酸检测对新冠病毒临床检验具有重要意义,各临床实验室应在现有研究报道及文件和指南的基础上,根据自身条件对新冠病毒核酸检测全过程进行严格的质量控制及合理的优化。
简介:摘要目的研究磁珠法、离心柱法及一步法对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸提取效率的差异。方法2021年3月5日,在南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院核酸采样室采集本科室员工咽拭子标本10份,将阳性质控品混入其中,作为模拟阳性标本。用磁珠法、离心柱法及一步法分别提取模拟阳性样本及其稀释样本RNA、人源性标本及其稀释样本RNA,用微量紫外分光光度计测量核酸的纯度(A260/A280比值)及浓度,并进行荧光定量PCR扩增实验,比较其循环阈值(CT)和提取效率。用3种方法提取模拟弱阳性标本,比较其扩增后的CT值差异。服从正态分布的计量资料以x¯±s表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果磁珠法、离心柱法、一步法提取的2019-nCoV核酸均能扩增出阳性结果。磁珠法与一步法提取的RNA扩增CT值差异无统计学意义(t=‒0.995,P=0.376)。离心柱法提取的RNA较另外2种方法提取的RNA扩增后CT值小,离心柱法、磁珠法、一步法提取的模拟阳性样本扩增后ORF1ab基因的CT值分别为29.28±0.06、30.82±0.14、29.79±0.01,差异有统计学意义(F=11.196,P=0.041);E基因的CT值分别为28.52±0.40、27.33±0.78、27.38±0.13,差异有统计学意义(F=3.407,P=0.169);N基因的CT值分别为28.61±1.02、27.24±0.20、27.25±0.47,差异有统计学意义(F=2.880,P=0.020);离心柱法、磁珠法、一步法提取的人源性标本扩增后人源基因CT值分别为19.68±0.36、20.14±0.06和20.58±0.49,差异有统计学意义(F=4.904,P=0.048)。人源性标本稀释2倍即对扩增人源基因CT值有影响,未稀释标本较稀释2倍标本CT值较小,相差2.95±0.22,差异有统计学意义(t=‒3.025,P=0.039)。一步法、磁珠法、离心柱法提取时间分别为(15.00±1.50)、(20.00±1.50)和(40.00±5.5)min,差异有统计学意义(F=688,P=0.027)。结论磁珠法、离心柱法及一步法均可用于2019-nCoV核酸提取,离心柱法提取效率较磁珠法及一步法高。
简介:【摘要】2020年12月以来临床上普遍存在核酸检测阳性率不够理想,本文主要阐述了核酸检测各个环节的要点和要求。核酸检测是直接找到病毒存在的证据,做好相关标本的采集及转运就显得尤为重要。通过对重点环节的管理,提高临床护理人员对新型冠状病毒核酸检测标本的认知,增加核酸标本的合格率,减少收集转运时间。因此,正确规范采集核酸对诊断新冠肺炎具有非常重要的意义。
简介:摘要目的通过比较6种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂的最低检出限、扩增效率、特异性、准确度以及与6种核酸提取试剂匹配性分析,为选择核酸提取试剂、扩增试剂以及临床诊疗提供科学依据。方法将国家标准物质进行浓度梯度稀释得到6个浓度梯度,用广州达安、北京金豪、武汉明德、四川迈克、江苏硕世和上海之江6种2019-nCoV核酸检测试剂(分别简写为DA、JH、MD、MK、SS、ZJ)检测靶基因,评价其最低检出限、扩增效率、准确度、特异性等性能。阳性质控品水平1、2(低中浓度)分别用6种核酸提取试剂提取(编号a~f)搭配6种2019-nCoV核酸检测试剂检测靶基因,比较不同核酸提取试剂和不同核酸检测试剂之间匹配情况,采用双因素方差分析。结果DA、JH、MD、SS试剂核衣壳蛋白(N)基因最低检出限为7.0×102拷贝数/ml;JH、MD、SS、MK试剂开放阅读框架1ab(ORF1ab)基因最低检出限为9.39×102拷贝数/ml;MK、ZJ试剂包膜蛋白(E)基因最低检出限为5.03×102拷贝数/ml;SS试剂N基因扩增效率89%,ORF1ab基因扩增效率为90%,扩增效率最高。6种2019-nCoV核酸检测试剂特异性均100%;a、b、c、d提取试剂与6种核酸检测试剂匹配性好,但a提取试剂更适合搭配SS、MK和ZJ核酸检测试剂(P<0.05),d提取试剂更适合搭配MD、SS、DA、JH和MK核酸检测试剂(P<0.05),e提取试剂更适合搭配SS核酸检测试剂(P<0.05),f提取试剂更适合搭配DA、JH核酸检测试剂(P<0.05),e和f试剂不适合搭配MK和ZJ。结论6种核酸检测试剂性能良好,实验室根据实际情况选择合适的提取试剂和检测试剂搭配使用。
简介:DNA提取是进行DNA检测的第一步。也是最重要的环节之一。磁珠DNA自动提取系统的出现为DNA提取提供了更为有效的平台,使DNA的提取过程更加简易,操作更加便捷,避免了人为因素带来的误差和污染,在保证提取质量的同时缩短了实验的整体时间,同时使提取更加精确和均一。DNA自动提取工作站与磁珠提取法相结合设计而成的磁珠DNA自动提取系统正逐渐成为DNA提取步骤中被广泛普及和应用的主流方法之一。GA318-32A核酸自动提取仪即是基于磁珠提取法研制而成的一套高通量、高灵敏度的自动核酸纯化提取设备。它可在短时间内利用机器磁棒架上的磁棒,将吸附有核酸的磁珠移动至不同的试剂孔内,经过细胞裂解、核酸吸附、清洗与洗脱,最终得到高纯度核酸。从GA318—32A核酸自动提取仪的结构原理、主要特征、法医学应用等方面进行阐述,以期使该仪器在法医DNA检测中得到更广泛的应用。